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仪器介绍:
随着生物质谱技术的快速发展,蛋白质和多肽分析的分辨率、灵敏度、准确性、鉴定能力大为提高。尤其是Top-down蛋白质鉴定方法大量使用后,传统的一维、二维电泳或液相色谱等样品制备技术已经不能满足需要。分析前如何降低样品的复杂程度、获得完整蛋白质、富集低丰度蛋白质、降低高丰度蛋白质对低丰度蛋白质的干扰、保留蛋白质的各种翻译后修饰状态、提高样品处理通量等,已成为蛋白质样品制备方法的重要前提。
英国Expedeon公司推出了一套新型的蛋白制备电泳仪— Gelfree 8100 Fractionation System。该系统使用凝胶洗脱液相组分截留电泳技术(gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis,GELFREE),基于蛋白质分子量的不同,对完整蛋白质进行分组,使用移液器在液相中回收蛋白质。该系统能在短时间内同时处理8个样品。在3.5kDa—500kDa范围内,相对于其它传统分组方法,具有上样量大、重现性好、分辨率高、回收率高、分离速度快和操作简单的优点。能增大蛋白质组分析的覆盖范围,改善后期质谱分析的结果,提高蛋白质鉴定结果的可信度。
特点及应用:
1.基于分子量的不同对完整蛋白质进行分离纯化,收集;
2.蛋白质样品在液相中回收,避免了传统一维、二维电泳后的染色和条带或点位切割步骤;
3.蛋白质分离范围高达3.5kDa—500kDa;
4.8个分组通道,满足高通量样品处理的要求,每个通道最多可将样品分为30个组分;
5.用户可根据需要自行设置蛋白质分组程序,分离纯化特定的目标蛋白;
6.样品容量大,每个通道蛋白质上样量最高可达1mg,是普通一维电泳的5倍以上,
有利于富集低丰度蛋白质;
7.回收率高,>80%;
8.重现性好,CV<15%;
9.分离过程不受蛋白质疏水性或等电点的影响,这就意味着你几乎覆盖整个蛋白质组。
10.简化蛋白质组成的复杂程度,缩小复杂蛋白质样品的动态范围,便于使用LC-MS/MS进行Bottom-Up
蛋白质组学研究;
11.蛋白质回收后保留其完整性,便于进行Top-Down蛋白质组学研究,分析翻译后修饰、蛋白质异构体、氨 基酸衍生物等;
12.蛋白质回收后在溶液内消化,免去了费时的胶内消化步骤;
13.特别适合为LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印迹等分析方法制备样品;
Gelfree 8100蛋白制备电泳仪由主机和8通道电泳槽两部分构成。主机设计紧凑,能为8个独立的电泳通道提供电压,设置暂停用于收集组分。使用触摸屏,可以设置电压、组分系列和使用的通道数等参数,进行宽范围的组分分析或目标蛋白的富集。运行过程中,触摸屏实时显示每个通道电泳状态及电压电流值。
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