Ni-NTA纯化树脂,Ni-NTA Resin,是用于纯化6xHis标签重组蛋白的一种纯化介质,它是由4%交联的Sepharose耦连了一种四齿螯合剂NTA而得. Ni-NTA树脂用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6xHis标签重组蛋白。NTA,含有四个螯合区,较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6xHis可与Ni2+螯合,从而使His标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上,未结合的蛋白被洗涤下去,结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低PH缓冲液被温和的洗脱下来,从而得到高纯度的目的蛋白。
组分
50%的悬浮液(20%乙醇),已螯合Ni2+。
主要特征
该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力,可达5~20 mg/ml。
可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。
纯化程序简单,所得的蛋白纯度可高达95%。
Ni-NTA Resin可再生4-6次,重复使用。
应用
His标签蛋白的纯化。
蛋白结构与功能研究。
蛋白-蛋白以及蛋白-DNA之间相互作用的研究。
配体-受体之间相互作用的研究。
储存
4°C保存,切勿冻存。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性