产品名称:细胞蛋白提取试剂盒
产品规格:50T
膜蛋白提取试剂盒是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂,适用于从动物细胞和动物组织提取总膜蛋白。
提取过程简单方便,可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,
阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀
、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
细胞蛋白提取试剂盒,使用方法
1. 提取液准备:
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每500μl膜蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个以上细胞,在4℃,500×g条件下离心3-5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A,充分混匀。
5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟,至细胞充分裂解,细胞沉淀明显减少。
6. 在4℃,12000×g条件下离心5分钟。
7. 将上清吸入另一干净离心管,在37℃水浴5-10分钟。
8. 在37℃,1000×g力离心5分钟,此时溶液分为两层,下层是膜蛋白约为30-50μl。
9. 小心移除上层液体,收集上层部分留作备用分析。
10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分,混匀后冰浴2分钟,37℃水浴5-10分钟,37℃,1000×g力离心5分钟,此时溶液分为两层,下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体,保留下层。
11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做,一般不需要做)。
12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分,即得膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细胞蛋白提取试剂盒,注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
保存温度2-8℃
保质期1年
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