RAPA3G DNA聚合酶为经电子重构架的第三代Taq DNA聚合酶,第三代DNA聚合酶具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量等特征,从而使得RAPA3G系列产品可用于粗制样品的直接扩增,无需核酸纯化步骤。杂质耐受性方面,该酶可耐受植物中的多糖多酚;全血、血清、血浆中的肝素、高浓度的血红蛋白、甘油三脂;乙醇;胍盐;SDS等强PCR抑制剂。在血液直扩PCR实验中,RAPA3G PCR Mix性能与KAPA3G DNA聚合酶展现出同等的表现,其性能表现优于二代聚合酶(血液扩增Hemo KlenTaq Mix)。在植物直扩PCR实验中,RAPA3G PCR Mix在配合DNA释放剂的条件下与KAPA3G Plant PCR试剂盒性能一致。
长片段扩增能力方面,使用该酶可轻松扩增8kb的基因组片段,20kb的λ DNA,8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的扩增速度,可显著的缩短PCR的扩增时间,在常规测试条件下,10s的延伸时间可完成1kb的基因组DNA扩增。在PCR扩增成功率方面,与其它类型的PCR扩增试剂对比中,RAPA3G PCR Mix表现出卓越的PCR扩增成功率。此外,该酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶,因此其具有一定的保真性能(经蓝白斑测试,其保真性能约为Taq DNA聚合酶的56倍)。另外,RAPA3G系列产品均采用HaiGene专有的热启动技术,确保50°C以下完全无活性,仅有95°C加热5min以后才能恢复其活性,因此可最大限度的提高扩增的特异性,减少非特异性产物的产生。该PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性,产物部分带有"A"尾巴,部分为平末端,因此产物均可用于TA克隆或平端克隆。
特征和用途
快速扩增:具有6kb/min的扩增能力,1kb片段可在25min内完成扩增.
高成功率扩增:RAPA3G PCR Mix具有最高的PCR扩增成功率。
液体样品直接扩增:全血、血清、培养细胞、尿液等样本直接进行PCR扩增,无需核酸纯化。
组织样本直接扩增:叶片、种子、果实、动物组织等样品,可以直接扩增,也可采用DNA释放剂简单处理后直接扩增,无需核酸纯化。
长片段扩增:质粒、λ DNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA可以有效扩增>8kb。
高保真扩增:保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。
高特异性:采用HaiGene专有热启动技术,50°C以下无活性,仅有95°C加热5min才能恢复酶活。
储存
长期储存置于-20°C以下,可保存2年,避免反复冻融;短期使用置于4°C(3个月)保存,一经融化后请放置于4°C,勿再冻存。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性