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其他参数
热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1351-100U | 100U | 热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase) |
P-PR1351-1000U | 1000U | 热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase) |
产品介绍:
描述:
热 敏 双 链 DNA 特 异 性 核 酸 酶 (Heat labileds-DNA-specific Nuclease ,又名 ezDNase 或 HLdsDNase),为双链特异性核酸酶。其特异性的识别降解双链 DNA,对单链 DNA 或 RNA 几乎无活性,其降解 dsDNA的能力比 ssDNA 高~5000 倍。除此外,该酶降解双链 DNA的能力比 bovine DNaseI 高~30 倍,因此特别适用于去除RNA 样品中的基因组 DNA 污染。该热敏型双链 DNA 核酸酶可将 DNA 降解为 2~8bp 的产物,且 55℃ 5min 可使该酶不可逆失活,同时又能保持 RNA 和 ssDNA 的稳定性。除此外,本酶适合于,对基因组样品进行酶法片段化反应。
储存:-20℃ 可保存 3 年。
活性定义: 1 单位指 25°C 条件下 15min 将 10μg 基因组DNA 消化至 80%的产物<500bp,所需的酶量。
注意事项:
(1)1×dsDNase Buffer:20mM Tris-HCl pH8, 5mM MgCl2。该酶需要 1~5mM MgCl2。
(2)该酶对 K+敏感,反应体系中推荐 K+浓度低于 40mM。
(3)通常在 RT 反应中的用量为 0.1~0.5U/20 μl 体系。
(4)任何浓度的 SDS、盐酸胍均抑制该酶活性。
(5)该酶的最佳反应温度为 25~37℃,42℃ 30min 后活性损失 70%。
使用实例 1(对基因组 DNA 进行片段化反应)
1. 按以下组分配制反应体系
基因组 DNA 10 μg
10×dsDNase Buffer 2.5 μl
HL dsDNase (2 U/μl) 0.5-1 μl
Rnase Free H2O Up to 25 μl
2. 室温 25°C 孵育 15min,55~65°C 5min 加热失活。
使用实例 2(基因组 DNA 的去除)
1. 按以下组分配制反应体系
基因组 DNA 1 μg
10×dsDNase Buffer 2.5 μl
HL dsDNase (2 U/μl) 1 μl
Rnase Free H2O Up to 25 μl
2. 室温 25°C 孵育 30min,55~65°C 5min 加热失活。此时
基因组 DNA,通常 90%以上的产物被消化至<15bp
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
血液磷酸二酯酶3(PDE3)活性荧光定量检测试剂盒 | 大鼠钙结合蛋白(CR)elisa分析检测试剂盒 |
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