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其他参数
牛痘病毒-拓扑异构酶
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1398-500U | 500U | 牛痘病毒-拓扑异构酶 |
P-PR1398-5KU | 5KU | 牛痘病毒-拓扑异构酶 |
产品介绍:
描述:
该 Topoisomerase I 来源于牛痘病毒(vaccinia virus),通过基因重组方案制备纯化。其能解旋DNA的超螺旋结构,除此外其能识别并切割双链 DNA 末端 [5’C(T)CCTT↓],并且与 DNA 形成共价连接形成稳定复合物。该共价复合物遇
到DNA 的5’-OH基团后,重新连接形成完整 DNA 链。因此,使用该酶可作为 DNA 连接的有效工具,可用于 DNA 的载体连接(TOPO 克隆载体制备)、接头连接(NGS 建库)等实验。
操作方法:
DNA-载体连接
接头连接
储存:-20°C 可保存 3 年。
TOPO 酶保存液:20mM Tris-HCl,pH7.8,150mM NaCl,
0.1% Tween20,50%甘油。
反应实例 1(质粒解旋)
10×TOPO Buffer 2.5 μl
超螺旋质粒 DNA 1-20 μg
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
注意事项:
注意:
(1)双链接头 A 通常 5’做 NH2 封闭修饰,以防止自连接;接头 A 的 CCCTT 后通常包含 5-12bp 尾巴,再长的尾巴会导致连接效率大幅下降;
(2)双链接头 B 的 5’端必须包含-OH。
(3)由于该酶应用广泛,在不同的实验中使用策略不同,需要灵活运用。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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