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其他参数
甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(Fpg)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1365-800U | 800U | 甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(Fpg) |
P-PR1365-4000U | 4000U | 甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(Fpg) |
产品介绍:
描述:
Fpg (formamidopyrimidine [fapy]-DNAglycosylase,甲酰胺嘧啶 [fapy]-DNA 糖基化酶)也称作8-氧代鸟嘌呤 DNA 糖基化酶,既有 N-端糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-端糖基化酶活性可以切下双链DNA 上受损的嘌呤碱基,产生一个脱嘌呤(AP)位点。
AP-裂解酶活性可以切割 AP 位点的 3′ 或 5′ 端,因此可以除去 AP 位点,产生一个具有 3′ 和 5′ 磷酸的碱基缺口。被 Fpg 识别并切除的受损碱基包括:7,8-二羟基-8-氧代鸟嘌呤(8-氧代鸟嘌呤)、8-羟基腺嘌呤、fapy鸟嘌呤、甲基-fapy-鸟嘌呤、fapy-腺嘌呤、黄曲霉毒素B1-fapy-鸟嘌呤、5-羟基-胞嘧啶和 5-羟基尿嘧啶。
活性定义:
1 单位指在 10 μl 反应体系中,37℃条件下,1 小时内能够切割 1 pmol 含单个与胞嘧啶配对的 8-氧代鸟嘌呤的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量定义为一个活性单位。
热失活:60°C,10min。
反应条件:10 mM Bis-Tris(pH 7.0),10 mM MgCl2 ,1mMDTT, 100 μg/ml BSA,37℃ 温育。
酶储存液:50 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.5。
储存:置于-20°C 可保存 2 年,避免反复冻融。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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