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其他参数
测序后纯化试剂盒 ( 磁珠法)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1051-5ml | 5ml | 测序后纯化试剂盒 ( 磁珠法) |
P-PR1051-500ml | 500ml | 测序后纯化试剂盒 ( 磁珠法) |
产品介绍:
运输保存:常温运输,建议4℃保存。
PCR 后磁珠纯化方法及步骤 :
1.96孔反应板从PCR仪下机后,放入黑色的96孔板架上,配平,在5810R离心机,使用水平转头, 4000转/分(4000rpm)离心一分钟。
2.从4℃冰箱中取出磁珠工作液,手动或振荡器充分震荡磁珠液,使其重新悬浮, 每孔加入磁珠液 5-10ul(建议使用5ul),再加入 70%乙醇 50ul,盖上胶垫,混匀后震荡5分钟。
3. 将96孔反应板放入96孔磁力板上放置3分钟,使磁珠完全吸附在孔底处或至溶液完全变清亮。
4. 带磁力板弃上清(切记:样品板不要离开磁方板),去掉胶垫,垫上吸水纸,在5810R离心机上倒离心60 秒(300 转/分)。
5. 每孔加入 70%酒精50ul,盖上胶垫,重新震荡悬浮,放入96孔磁力板上放置3分钟,使磁珠完全吸附在孔底处或至溶液完全变清亮。
6.带磁力板弃上清(切记:样品板不要离开磁方板),去掉胶垫,垫上吸水纸,在5810R离心机上倒离心60 秒(300 转/分)。
7.重复5、6步一次。
8.每孔加入30ul 的灭菌后的超纯水,盖上胶垫,震荡使磁珠重新悬浮。
9.在5810R离心机上正离心 10秒(300 转/分)将侧壁水珠离下即可。
10.将96孔反应板从磁力架上取下来,转移到测序仪跑板专用磁力架上,更换胶垫并扣紧。
11.上机跑板(切记:上在带有磁铁的底座上,以免损坏毛细管)。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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