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其他参数
Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1373-500U | 500U | Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶 |
P-PR1373-5000U | 5000U | Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶 |
产品介绍:
描述:
RNase R 来源于 E.coli,通过基因工程重组表达,该酶为 Mg2+依赖的 3’-5’核糖核酸外切酶。其可消化所有线性 RNAs 底物,但不能消化环状 RNA(circular RNA)、套索 RNA(lariat RNA)、双链 RNA、3’突出端<7nt 的双链RNA。本酶可高效的去除不含二级结构的线性 RNA,从而纯化获得环 RNA 分子,用于后续 RNA-sequencing 等实验。
活性定义:在 20 mM Tris-HCl(pH7.5),100 mM KCl,0.5mM Mg2+条件下, 37°C 下水解 1 μg 的 poly-r(A)产物,所需酶量为 1 个活性单位。10xRNase R Buffer:200 mM Tris-HCl, 1 M KCl,5 mM
MgCl2,pH7.5
酶储存液:20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT ,50% Glycerol, 0.1% (w/v) Tween-20, pH 7.5。
储存:置于-20°C 可保存 3 年,避免反复冻融。
操作方法:
1. 配制反应体系
RNA 1-10 μg
10xRNase R Buffer 2.5 μl
Rnase Inhibitor (40 U/μl) 0.5 μl
RNase R (20 U/μl) 1-2 μl
DEPC-treated Water up to 25 μl
2. 37℃孵育 30-60min,反应完毕后可加入 5 mM EDTA终止反应。
注意事项:
(1) 在 total RNA 的消化中,由于含有二级结构较多的RNA,如 tRNA、rRNA、dsRNA 等,RNase R 对该类底物消化活性大幅下降,此时需要延长消化时间至 2h,并在 1h 时补加 RNase R 进行消化。必要时将反应温度提高至 45℃,以打开含有二级结构的 RNA 分子。
(2) 对于含有 highly structured 的 RNAs,RNase R 仍然无法完全消化, 稍后将推出 5’-3’的核糖核酸外切酶以解决此类问题。
(3) 据其它文献报道,在含有 highly structured 的 RNAs,可放大反应体积至 50 μl,可降低二级结构的影响,从而促进 RNA 的降解。
(4) 高温和长时间的孵育,可能导致 RNA 的非酶性断裂(水分子的 H+对二酯键的攻击)。因此,消化时间、反应温度均需要根据特定的实验进行优化和调整。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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