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其他参数
大肠杆菌蛋白提取液
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1334-100ml | 100ml | 大肠杆菌蛋白提取液 |
产品介绍:
描述:生产的大肠杆菌蛋白提取液采用独特的中性裂解 配方,从而最大限度的提高了后续提取蛋白的活性。使用该 溶液从大肠杆菌中提取蛋白不需要超声波破碎等复杂的操 作步骤,溶液置于 4°C 可长期保存,使用方便。该溶液室温 30min 可破碎 95%以上的细胞,裂解后的溶液可直接通过 Ni-NTA 等纯化填料进行蛋白纯化。该溶液既可适用于小量 蛋白表达检测,也适用于大量蛋白的表达纯化试验;既适用 于纯化可溶型蛋白,也适用于纯化包涵体蛋白。
操作方法:
♦ 可溶型蛋白操作方法(1 ml 菌液为例)
1. 8,000rpm 室温离心 3min 后,弃上层培养基,留取管底部菌体(尽量弃除掉培养基)。
2. 加入 200 μl(重悬体积不得少于 50 μl)大肠杆菌蛋白提取液重悬菌体,用吸头吹打至无可见细胞团块。
注:为降低溶液粘度,可加入 Benzonase 核酸内切酶至 0.25U/μL;加入终浓度为 1 mg/ml 的溶菌酶效果更佳。
3. 置于室温孵育 30-60min,期间轻弹离心管数次以加速裂解。
4. 裂解完成后 13,000rpm 于 4℃离心 15-20min,将上清转移至新的容器中,溶液可直接进行下一步纯化或检测试验。
♦ 包涵体蛋白操作方法
5. 上述步骤 4 中,弃上清,保留沉淀组分,用 200 μl 的大肠杆菌蛋白提取液重悬沉淀。
6. 加入溶菌酶至终浓度 1 KU/ml,混合均匀,室温孵育 10min。
7. 加入 800 μl 的灭菌水混合均匀。
8. 13,000 rpm 室温离心 15-20min,弃上清后用 900 μl 灭菌水重悬沉淀,然后加入 200 μl 大肠杆菌蛋白提取液,混合均匀。
9. 13,000rpm 室温离心 15-20min,重复步骤 8 三至五次。
10. 将沉淀溶解于变性溶液中,进行下一步纯化或复性试验。
主要特征:
♦ 单组分溶液,使用方便
♦ 裂解迅速,蛋白不会变性
♦ 适用于小量或大规模蛋白表达
♦ 适用于可溶性蛋白和包涵体纯化
应用:大肠杆菌的裂解和包涵体纯化。
储存:置于 4°C 可保存 2 年。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
大鼠Syndecan-1/CD138(SDC1)elisa检测试剂盒 | 磷酸化肝细胞生长调节因子酪氨酸激酶底物抗体 phospho-HGS (Tyr334) |
小鼠溶质载体家族30成员4(SLC30A4)elisa检测试剂盒 | 磷酸化脑胶质瘤相关蛋白抗体 phospho-Gli1 (T101/ S102/S104) |
一抗涂板(COATING)缓冲液 | CDK5激活结合蛋白1抗体 CDK5RAP1 |
人G蛋白偶联雌受体1(GPR30)elisa检测试剂盒 | 核糖体p70 S6蛋白激酶抗体 RPS6KB1 |
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通用型猪胸膜肺炎感染(Actinobacillus pleuropneumoniae;App) | DENND5B蛋白抗体 DENND5B |
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甲基化样蛋白9抗体 METTL9 | 大肠杆菌蛋白提取液泛素蛋白连接酶D1抗体 UBE2D1 |
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