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- 产品分类:蛋白相关
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
His标签纯化树脂（Ni-NTA Resin）
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1338-20 ml (50％浆体) | 20 ml (50％浆体) | His标签纯化树脂（Ni-NTA Resin） |
产品介绍：
描述：
Ni-NTA Resin 是用于纯化 6×His 标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由 4%交联的 Sepharose 耦连了一种四齿螯合剂 NTA 而得. 它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的 6xHis 标签重组蛋白。NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合 Ni2+。6×His 可与 Ni2+螯合，从而使 His 标签蛋白结合在 Ni-NTA 纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低 PH 缓冲液被温和的洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。
操作方法：
A. 非变性条件下抽提 His 标签蛋白
1. 样品准备
1) 准备细胞，接种，诱导表达。对于实验室用的 pET 载体表达系列，在细胞 OD600=0.5-0.8 时，用 1 mM IPTG 诱导 1-3 小时，可以获得理想的表达效率。收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤 2 操作。
2) 加入 1/20 细胞生长体积的 NTA-0 Buffer (20 mMTris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl,10% Glycerol)和 1 mM PMSF。
注意：PMSF 见水分解，需要在使用前加入。
3) 将细胞悬浮起来，超声或匀浆破碎细胞。该步骤冰上操作。
4) 加入 10% Triton X-100, 使终浓度为 0.05%，充分混匀，冰上放置 15 分钟。
5) 13,000 转/分(20,000xg 以上)，4°C 离心 15min。取上清，置于冰上备用或-20°C 保存。
2. 层析
1) 将 NTA 树脂装入合适的层析柱，层析用 10 倍 NTA 体积的 NTA-0 Buffer 平衡填料。
2) 将上清样品加至 NTA 层析柱中，流速在 15 ml/h 左右，收集穿透部分，用于 SDS/PAGE 分析蛋白质的结合情况。
3) 层析用 5 倍 NTA 体积的 NTA-0 Buffer 洗涤填料，流速控制在 30 ml/h 左右。
4) 再分别用 5 倍 NTA 体积的 NTA-20、NTA-50、NTA-100、NTA-250 洗脱填料，流速控制在 15 ml/h 左右，收集洗脱液，每管收集一个 NTA 体积。
5) 确定目标蛋白质在洗脱液中的分布情况。最为有效的方式是 SDS/PAGE 分析。也可以用 Bradford 蛋白质测定试剂盒，快速确定蛋白质的含量，然后用 SDS/PAGE 分析蛋白质的分布。
6) 目标蛋白质需要进一步纯化需要根据蛋白质的用途确定。纯化的目标蛋白质的保存条件需要根据蛋白质的性质和用途确定。
3. 溶液配方
NTA-0 Buffer:
20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,
NTA-20 Buffer:
20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,
20 mM Imidazole(咪唑)
NTA-50 Buffer:
20 mM Tris-HCl pH7.9, 0.5 M NaCl, 10% Glycerol,
主要特征：
该纯化介质与 His 标签蛋白具有极高的亲和力，可达5-20 mg/ml。
可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的 His标签蛋白。
纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达 95％。
Ni-NTA 可再生 4-6 次，重复使用。
组成：50％的悬浮液（20％乙醇），已螯合 Ni2+。
应用
His 标签蛋白的纯化。
蛋白结构与功能研究。
蛋白-蛋白以及蛋白-DNA 之间相互作用的研究。
配体-受体之间相互作用的研究。
储存：4℃保存，可保存 2 年。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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