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Bst 4.0 Basic Mix (液体预混)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1245-100Tx20μl | 100Tx20μl | Bst 4.0 Basic Mix (液体预混) |
产品介绍:
该制品为单一组分的 MasterMix(2 倍浓度),包含了反应缓冲液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。Bst4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依赖于 RNA 模板的聚合酶活性(逆转录),还具有依赖于 DNA 的聚合酶活性,因此无论DNA 或 RNA 样本均可使用该制品进行高效的恒温扩增。该制品是进行 LAMP 及 RT-LAMP 扩增反应的绝佳试剂。优化的反应体系,确保快速的完成检测试剂的反应体系建立。该系列产品不包含任何其它辅助染料,在 LAMP 的扩增搭配 OG 橙绿变色管进行可视化变色反应。除此外,该制品还可以用于其它恒温扩增实验,包括 CPA、SMAP 等。
储存:长期保存制品于-20℃,保存 2 年。
使用实例(以 LAMP OG 橙绿变色为例)橙绿变色染料(OG Dye)以冻干的形式预加在 8 联管盖上。在 LAMP 反应完毕后(在反应完毕前,务
必不能将管盖上染料混入反应液中),将 0.2ml EP 管颠倒溶解 OG 染料后。LAMP 的反应产物将与 OG 染料形成强烈的绿色肉眼可见变色反应(阳性),而未发生扩增的 EP管为深橙色(阴性)。
(1)配制反应体系
在 0.2ml EP 反应管中加入下述试剂
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 浓度:FIP/BIP 分别为 16 μM、LoopF/B 分别为 4 μM、F3/B3 分别为 2 μM全部试剂加入完毕后,轻弹 EP 管底部后,再盖上 OG 橙绿变色管(盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置,以防止将管盖上的 OG 染料溶解,OG 染料一旦混入反应液中将会终止 LAMP 反应)。
首次实验 LAMP Primer Mix 分别采用 1、1.5、2 μl,以阴性不变色,阳性样品正常变色为标准,作为后续测试用量。
(2)反应体系配好后,置于 60~68°C(首次实验采用65°C)进行反应 20~45min。(扩增良好的引物组合,通常 25min 即可变色,一般不超过 45min,首次实验设置20、25、30、45min)。
(3)观察结果:观察结果时,尽可能不要与配制反应空间共用,以防止污染操作台。将反应 EP 管倒置,并手腕轻甩,反应液浸泡 EP 管盖上的 OG 染料,静置 30s。再将 EP 反应管正置,并轻甩反应液到 EP 管底部,此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色,而阴性未发生扩增的管将为深橙色。
注意事项:
1. 在用于其它恒温扩增反应时(如 CPA、SMAP 等),可参考如上策略进行使用,反应时间可能会需要调整。
2. 关于矿物油的使用,在配制完 LAMP 反应体系后,可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部,以减少气溶胶的污染。
3. 鉴于特殊的生产工艺, 全系恒温扩增 Mix 系
列均不能进行浊度分析。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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