产品名称:植物NADP-苹果酸酶(NADP-ME)Elisa试剂盒
产品规格:48T/96T
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的指标抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入指标,再与HRP标记的-O-甲基转移酶(COMT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过 洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度
(OD值),通过标准曲线计算样品中指标浓度。
植物NADP-苹果酸酶(NADP-ME)Elisa试剂盒组成:
(1)结合物及标本的稀释液;
(2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(3)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(4)酶的底物;
(5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中);
植物NADP-苹果酸酶(NADP-ME)Elisa试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
植物NADP-苹果酸酶(NADP-ME)Elisa试剂盒注意事项
1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
10.试剂盒保存:;2-8℃。
11.有效期:6个月