获取电话HCE-T 人角膜上皮细胞系 百欧博伟生物
一、背景与概述
人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜系眼球外膜呈半球形向前突出的部分。占外膜的1/6，横为椭圆形，约11.5～12mm，垂直径约10.5～11mm，厚约1mm，中央部稍Chemicalbook薄约0.8mm；前面曲率半径均值为7.8mm，后面为6.8mm。角膜由致密结缔组织组成，可分为5层，即上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层及内皮细胞层。上皮细胞覆盖于身体表面并衬贴于体内空腔器官腔面的细胞。其排列有明显极性，一面朝向身体表面或腔面，称游离面；一面向着深部的结缔组织，称基底面。上皮细胞具有强大的角生和更新能力。上皮组织具有保护、吸收、分泌和排泄等作用。当上皮细胞受损时，则影响机体的防御功能。
二、产品信息
平台编号：Bio-132914
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：HCE-T
中文名称：HCE-T 人角膜上皮细胞系
英文名称：HCE-T
规格：T25
形态特性：上皮样
生长特性：贴壁生长
特征特性：已通过STR
培养条件：DMEM/HamF12 + 5% FBS + 5μg/ml Insulin + 10ng/ml human EGF+10%FBS
传代方法：1:3传代，2-3天换液一次
冻存条件：无血清细胞冻存液
备注：本库的细胞系（株）仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的。使用者不得将本库细胞系（株）转让给第三者。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
三、人角膜上皮细胞体外培养
1、将供体角膜放于消毒过的容器上，上皮面朝上，用手术刀切成12个三角形组织片。应一刀切下，避免锯割。如此仔细处理角膜可减少对胶原基质的破坏和成纤维细胞的脱落。
2、将角膜组织片的上皮面朝向下，放入用鼠尾Ⅰ型胶原蛋白预处理的6孔培养板，每孔放4个组织块。
3、用镊子轻压组织片，以便使组织块与培养皿表面充分接触。将组织片放置20min，使其变干。
4、将一滴KGM轻轻滴于组织片上，在37℃和5%CO2条件下孵育过夜。尽管从眼库得到的供体角膜是用抗菌素的培养液保存的，但全部操作应在无菌条件下进行。
5、第2d，在培养皿中加入1ml培养液。在培养早期，可观察到细胞仅从角膜缘处迁出，但没有细胞从角膜或虹膜迁出。无血清培养液含有低浓度钙离子（0.15mmol/L），减少胶原基质降解，故这种培养液可减少成纤维细胞长出。
6、在植入角膜组织片后第5d，用镊子将组织片取出，再加入3ml培养液。取出组织片后，贴壁细胞继续增值。第2周，细胞生长形成单层，呈现上皮具有的典型卵石状排列特征。每个角膜约获得6×106个上皮细胞。每周换液2次。
7、扩增培养：取出组织片后，当细胞融合达70%-80%时，用PBS浸洗细胞。然后，在37℃条件下用胰蛋白酶-EDTA液处理4min。用含有10%FBS的PBS终止消化。将细胞离心后，用KGM混悬。计数细胞，以1×104个/cm2密度将细胞接种于涂有FNC的培养皿。在37℃、5%CO2条件下培养。1d后换培养液。
四、主要功能
人角膜上皮细胞其主要功能如下：
①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；
②人角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；
③人角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。人角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
五、应用
用于IL-1β诱导人角膜上皮细胞产生IL-6和IL-8的分子机制及地塞米松对其抑制作用的研究：
IL-1β诱导HCECs产生IL-6和IL-8的分子机制,主要以三条经典的MAPKs信号通路,即ERK,p38和JNK信号通路,以及转录因子NF-κB为分子靶点,研究其在IL-1β诱导HCECs产生IL-6和IL-8中的作用以及IL-1β活化的三条MAPKs信号通路与IL-1β诱导的NF-κB亚基p65入核和IL-1β上调的NF-κB转录活性之间的内在联系。
方法：通过实时定量聚合酶链反应（qPCR）技术检测给予和不给予IL-1β刺激的HCECs IL-6和IL-8 mRNA水平,以及抑制三条MAPKs信号通路和转录因子NF-κB后,再给予IL-1β刺激的HCECs IL-6和IL-8 mRNA水平。
采用Western blot技术检测给予和不给予IL-1β刺激的三条经典的MAPKs信号通路及NF-κB抑制因子IκBα的磷酸化水平。通过细胞免疫荧光染色技术检测给予和不给予IL-1β刺激的HCECs NF-κB亚基p65的亚细胞定位以及分别单独抑制三条MAPKs信号通路后再给予IL-1β刺激的HCECs p65的亚细胞定位；行双荧光素酶报告基因检测技术检测给予和不给予IL-1β刺激的HCECs NF-κB的转录活性及分别单独抑制三条MAPKs信号通路后再给予IL-1β刺激的HCECs NF-κB的转录活性。
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