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超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前每瓶加 6mL 蒸馏水充分溶解。2-8℃保存 4 周。
产品说明:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
AP-TEMED 系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成 NO2-,NO2-与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在 530nm 处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与 530nm 的吸光值呈负相关。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例(建议称取约 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000 g,4℃,离心 10 min,取上清,置于冰上待测。
2、液体:直接检测。若有浑浊则离心后取上清待测。
3、细胞样本:收集细胞到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细胞(功率200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 530 nm,蒸馏水调零。
2、 操作表(1.5mLEP 管):
三、超氧阴离子清除能力计算
超氧阴离子清除率(%)=(A 空白-A 测定)÷A 空白×100%
注意事项:
1、样本制备好之后,立刻进行测定,请勿将样本进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。
实验实例:
1、 称取0.1 g黄杨叶片组织,加入1 mL提取液,冰浴匀浆,10000 g,4℃条件下离心10 min;取上清置于冰上待测。使用1 mL玻璃比色皿,按照测定步骤操作,计算A空白=0.666,A测定=0.157,按公式计算超氧阴离子清除率=(0.666-0.157)÷0.666×100%=76.4%
2、 吸取125μl的羊血清,使用1 mL玻璃比色皿,按照测定步骤操作,计算A空白=0.666,A测定=0.193,按公式计算活性超氧阴离子清除率=(0.666-0.185)÷0.666×100%=72.22%
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!