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获取电话血清淀粉酶（AMY）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书
可见分光光度法
规格: 50T/24S
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入 25mL 试剂二，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解；用不完的试
剂 2-8℃保存 1 个月。
2、 试剂三的配制：将试剂三 A 倒入试剂三 B 中，用蒸馏水定容至 20mL，2-8℃避光保存一个月。
3、 标准品：10mg 淀粉标准品。临用前加 10mL 试剂二，置于常温水中并加热至煮沸，配成 1mg/mL 淀粉标准液。用不完的试剂 2-8℃保存 1 个月。
产品说明：
血清淀粉酶( Serum amylase， AMY) 属于 α-淀粉酶，以无规则方式水解多糖分子内部的 α-1,4 糖苷键，生成寡聚糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。AMY 主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指肠、肺、子宫、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。
AMY 催化淀粉分子中的 α-1,4 糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在 570nm 下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备和仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅/培养箱、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取
取 100μL 血清和 400μL 蒸馏水混合（即将血清稀释 5 倍），分为 2 管 250μL 分别作为测定管和对照管。若实
验后所测数值偏大或者偏小，可以调整稀释比例（比如数值偏小可以将 200μL 血清和 300μL 蒸馏水混合即将血清
稀释 2.5 倍）
二、测定步骤和加样表
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。
2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为 0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL 的标准溶液。
3、 按操作表依次加入各试剂：
混匀后于 15min 内测定 570nm 处测定管、对照管、空白管 1、标准管、空白管 2 的吸光度，分别记为 A 测定、A 对照、A 空白 1、A 标准和 A 空白 2，计算 ΔA 测定=（A 空白 1-A 空白 2）-（A 测定-A 对照），ΔA 标准=A 标准-A 空白 2。标准曲线、空白管 1、空白管 2 做 1-2 次即可。
三、AMY 活性计算
1、 标准曲线的绘制
以 ΔA 标准为 y 轴，以标准溶液浓度为 x 轴，绘制标准曲线，得到方程 y=kx+b。将 ΔA 测定带入方程得到 x（mg/mL）。
2、按照血清体积计算：
单位定义：每mL血清每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。
AMY活性 (U/mL)= x×V样÷V样÷T×F =0.1×x×F
V样：加入反应体系中样本体积，0.25 mL；T：反应时间，10min；F：稀释倍数。
1. ΔA 测定大于 1.5 时，可以对样本进行适当稀释后测定。
2. 反应完成后需在 15min 内测定吸光度。
1、 取 100μL 牛血清和 400μL 蒸馏水混合（即血清稀释 5 倍）后，按照测定步骤操作，计算 ΔA 测定= （A 空白1-A 空白 2）-（A 测定-A 对照）=（1.137-0.029）-（0.986-0.012）=0.134，带入标准曲线 y=1.9683x+0.0082，计算 x=0.0639，按公式计算活性：
AMY（U/mL）=0.1×x×F =0.1×0.0639×5=0.0320 U/mL。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
