找不到产品？留下需求帮您找
一键询价-
小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒
现货
3200￥
-
德国WTW 光度计配套试剂
现货
面议
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒） S6009M
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
一周
875￥
-
Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒
一周
516￥
-
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
一周
1244￥
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒）
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
博尔森 | 一周
875￥
获取电话α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）活性检测试剂盒说明书
微量法
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、试剂一：临用前取 1 支加入 1.37 mL 蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂建议分装后-20℃保存一周，避免
反复冻融。
2、标准品：5 μmol/mL 的对-硝基苯酚。
产品说明：
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Arabinofuranosidase，α-L-Af）属于糖基水解酶家族，可以从含有阿拉伯糖残基的多聚物如阿拉伯木聚糖、阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖等的非还原末端水解生成一个 L-阿拉伯糖分子。该酶在半纤维素降解以及果实的成熟软化过程中有着重要作用。
α-L-Af 分解对硝基苯基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚，对-硝基苯酚在 400 nm 处有最 大吸收峰，通过测定 400 nm 处吸光值变化可计算得 α-L-Af 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 15000 g，4℃，离心 10 min，取上清（若为绿色植物的茎、叶、芽等组织，建议将上清用提取液稀释 5 倍后检测；若为果肉等组织，上清可直接检测或根据预测定结果稀释相应倍数后检测）置于冰上待测。
2、细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000︰1 的比例（建议 500 万个细胞或细菌加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 200 W，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 min）；然后 15000 g，4℃，离心 10 min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 400 nm，蒸馏水调零。
2、 将 5 μmol/mL 的对-硝基苯酚标准液用提取液稀释为 500、250、125、62.5、31.25、15.625 nmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表：(在 1.5 mL 离心管中)
三、α-L-Af 活性计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y＝kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（nmol/mL）。
2、 α-L-Af 活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每 mg 蛋白每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活（U/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T=2x÷Cpr
（2）按样本质量计算
酶活定义：每 g 样本每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活（U/g 质量）=x×V 提取÷W÷T=2x÷W
（3）按照细胞或细菌数量计算
酶活定义：每 104 个细胞每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活（U/104 cell）=x×V 提取÷细胞数量（万个）÷T=2x÷细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：每 mL 样本每小时产生 1 nmol 对-硝基苯酚为 1 个酶活力单位。
α-L-Af 酶活（U/mL）＝x×V 样÷V 样÷T＝2x
V 提取：提取液体积，1 mL；V 样：加入的样本体积，0.06 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，30 min。
注意事项：
1、 A 或 ΔA 大于 1.2 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
2、 正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定，若浓度过高，建议将样本用提取液稀释适当倍数后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数；若浓度过低，建议在样本提取时增加组织质量。
3、 加入试剂二后，建议 5 min 内读取 OD 值。
实验实例：
1、 取 0.1g 黑麦穗进行样本处理，取上清稀释 2 倍后，按测定步骤操作，使用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A对照管=0.642-0.276=0.366，带入标准曲线 y=0.0024x-0.0045，计算 x=154.375，按样本质量计算酶活得：
α-L-Af 酶活（U/g 质量）=2x÷W×2（稀释倍数）=2×154.375÷0.1×2（稀释倍数）=6175 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
