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β-淀粉酶活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)可见分光光度法

β-淀粉酶活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)可见分光光度法

价格: 500

品牌:博尔森

供货周期: 一周

货号:BES-2594BTK

规格:50T/24S

β-淀粉酶(β-AL)活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)说明书

可见分光光度法

规格:50T/24S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

QQ截图20220615142154.jpg

溶液的配制:

1、 试剂一:临用前加入 20mL 试剂三,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂 2-8℃保存 8 周;

2、 标准品:10 mg 淀粉标准品。临用前加 10 mL 试剂三,置沸水浴中振荡溶解,配成 1 mg/mL 淀粉标准液。2-8℃保存四周。

产品说明:

淀粉酶负责水解淀粉,主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开 α-1,4 糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

碘可以与未被淀粉酶水解的淀粉结合,生成在 570nm 下有特征吸收峰的复合物,其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。α-AL 耐酸,β-AL 不耐热。根据上述特性,钝化其中之一,就可测得另一种活性。

QQ截图20220615142154.jpg

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织:称取约 0.1g 样本,加 1mL 蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取 15min,每隔 5min 振荡 1 次,使其充分提取;6000g,常温离心 10min,吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体:直接检测。(若有浑浊则离心后进行测定)

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至570nm,蒸馏水调零。

2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的标准溶液。

QQ截图20220615142154.jpg

3、 按操作表依次加入各试剂:

QQ截图20220615142154.jpg

 混匀后于1mL玻璃比色皿中测定570nm下的吸光度,从左到右分别记为A1、A2、A3、A4、A5、A6和A7,计 算ΔAα=A5-(A1-A2),ΔA总=A5-(A3-A4),ΔA标准=A6-A7。空白管、标准曲线只需做1-2次。

三、β-淀粉酶活性计算

QQ截图20220615142154.jpg

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注意事项:

吸光值大于1.5或者ΔA大于0.8时,可以对样本进行适当稀释后测定。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!




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