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上海博尔森生物科技有限公司

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细胞壁结合酸性转化酶活性检测试剂盒微量法

价格：￥ 1120

品牌：博尔森

供货周期：一周

货号：BES-2543BTK

规格：100T/48S

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细胞壁结合酸性转化酶（CWI）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

QQ截图20220615142154.jpg

溶液的配制：

1、试剂二：临用前加入 20 mL 试剂一，充分溶解后待用；

2、标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水充分溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，4℃保存一周。

产品说明：

蔗糖转化酶（Invertase，Inv）不可逆的催化蔗糖裂解形成葡萄糖和果糖，在植物蔗糖代谢中发挥着重要作用。Inv根据最适 pH，可分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI），其中 AI 根据亚细胞定位的差异又可分为可溶性酸性转化酶（Soluble acid Invertase，SAI）和细胞壁结合酸性转化酶（Cell wall-bound acid Invertase，CWI）。 CWI以离子键的形式结合在细胞壁上，在“库”组织韧皮部蔗糖卸载、蔗糖质外运输、植物的生长发育以及抵抗各种胁迫中起着重要作用。

CWI 催化蔗糖降解产生还原糖，还原糖与 3,5 –二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 CWI 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液一体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液一）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000g，离心 10min，弃上清，留沉淀；沉淀中加入 1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，4℃，12000g 离心 10min，弃上清，留沉淀；沉淀中加入 1mL 提取液二，充分混匀，4℃浸提 15h，4℃，12000g，离心 10min，取上清置于冰上待测。

二、测定步驟

1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、将 10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 2、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3mg/mL 的标准溶液备用。

3、操作表 (在 1.5mL 离心管中操作) ：

QQ截图20220615142154.jpg

三、CWI活性计算

QQ截图20220615142154.jpg

注意事项：

1. 当 A 或 ΔA 超过 1.5 时，建议将样本用提取液二稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。

2. 95℃水浴时 EP 管盖紧，防止水分散失，待冷却至室温后（建议每次实验后冷却时间保持一致），再进行下一步操作，避免液体飞溅烫伤以及影响试验数据。

实验实例：

1. 取 0.1g 丁香叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，最后取上清后按照操作步骤操作，用 96 孔板测得 A 对照管=0.358，A 测定管=0.566，标准曲线 y=0.8552x-0.1864，A 空白管=0.068，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.566-0.358=0.208，x=（0.208+0.1864）÷0.8552=0.461，按样本质量计算酶活得：

CWI 酶活（U/g 质量）=33.33x÷W=33.33×0.461÷0.1= 153.711 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

生化试剂细胞壁结合酸性转化酶活性检测试剂盒微量法由上海博尔森生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于流式试剂/试剂盒细胞壁结合酸性转化酶活性检测试剂盒微量法的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应细胞壁结合酸性转化酶活性检测试剂盒微量法外，上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供：二安替比林甲烷、焦硫酸钾、偶氮甲碱H

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