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蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 2.5 mL 试剂一充分溶解待用,用不完的试剂建议分装后,-20℃保存,避免反复冻融;
2、 标准品:20 mg 果糖,临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解,配成 20 mg/mL 果糖溶液备用,4℃保存一周。
产品说明:
蔗糖合成酶(Sucrose Synthase,SS)是植物糖代谢过程的关键酶,负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应,其分解活性可以催化蔗糖水解成 UDPG 与果糖, 参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向 SS-I 催化蔗糖和 UDP 生成果糖与 UDPG,果糖与 3,5 –二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质,通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 SS-I 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,8000g,离心 10min,取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 将 20mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 8、6、5、4、3、2、1mg/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表 (在 1.5mL 离心管中操作) :
三、SS-I活性计算
注意事项:
1. 当 A 或 ΔA 超过 1.5 时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
2. 95℃水浴时 EP 管盖紧,防止水分散失,待冷却至室温后(建议每次实验后冷却时间保持一致),再进行下一步操作,避免液体飞溅烫伤以及影响试验数据。
实验实例:
1. 取 0.1g 黑麦草加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得 A 对照管=0.111,A测定管=0.408,标准曲线y =0.1231x-0.0365,A空白管=0.050,计算ΔA=A测定管-A对照管=0.408-0.111=0.297,x=(0.297+0.0365) ÷0.1231=2.7092,按样本质量计算酶活得:
SS-I 酶活(U/g 质量)=33.33x÷W=33.33×2.7092÷0.1= 902.976 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!