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木质素含量检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液配制:
1. 试剂三:自备,石油醚,约需要 30mL。
2. 试剂四:该试剂具有强挥发性和一定的毒性,注意在通风橱操作并且每次用完用封口膜密封保存。
3. 试剂五:试剂有腐蚀性,注意防护。
产品说明:
木质素是构成植物细胞壁的成分之一,具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁,为次生壁主要成分。
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵、EP管、封口膜、冰乙酸、石油醚、30-50目筛和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
样本 80℃烘干至恒重,研磨,过 30-50 目筛,称取约 5mg 于 1.5mL EP 管中。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至280nm,冰乙酸调零。
2、 操作表(在1.5mL离心管中依次加入下列试剂):
乙酰化:
三、木质素含量计算
木质素含量(mg/g)=ΔA÷ε÷d×V检测÷(V上清×W÷V乙酰化)=2.184×ΔA÷W
木质素的百分含量(%)=木质素含量÷1000×100 %=0.2184×ΔA÷W
V乙酰化:乙酰化反应体积,1.02mL;ε:木质素消光系数,23.35mL/mg/cm;d:比色皿光径,1cm;V上清:
上清液体积,0.02mL;V检测:检测体积,1mL;W:样本质量,g;1000:换算系数,1g=1000mg。
注意事项:
1. 试剂四有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。
2. 加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人身伤害。
3. 冰乙酸具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱内操作。
4. 取上清加冰乙酸步骤根据自己样本乙酰化程度,冰乙酸的用量可调整,保证吸光值在0.1-0.8之间即可,并在公式中参与计算。
5. 由于冰乙酸具有挥发性,建议用比色皿进行测定实验。实验混匀后必须立即测定!
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!