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获取电话离子结合型果胶（ISP）含量检测试剂盒说明书
微量法
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 提取液一：80%乙醇，自备。即将 80 mL 无水乙醇和 20 mL 蒸馏水混合。提供一个 125mL 空瓶。
2、 试剂一：浓硫酸 30 mL，自备。
3、 标准品：10 mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943 mL 提取液三，配成 50 μmol/mL 的标准液。
产品说明：
果胶（Pectin）是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。
利用带有螯合剂的酸性提取液提取离子结合型果胶（ISP），其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm处有最 大吸收峰。
技术指标：
最 低检出限：0.0946 μmol/mL
线性范围：0.1-2 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴 20min，冷却至室温，4000g 25℃离心 10min，弃上清。沉淀加入 1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗 2 遍（涡旋振荡 2min 左右，4000g 25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入 1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡 15 小时，4000g 25℃离心 10min，弃上清，加入 1mL提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清液待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 将50μmol/mL 标准液用提取液三稀释为2、1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表：
三、离子结合型果胶含量的计算
1、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。
2、离子结合型果胶含量的计算：
离子结合型果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液三÷W =x÷W
V提取液三：加入提取液三的体积，1mL；W：样本质量，g。
注意事项：
1、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。建议每次实验冷却时间保持一致。
2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
实验实例：
1、 取 0.1g 迎春叶片加入 1mL 提取液一，进行样本处理，取上清液按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA测定=A 测定管-A 对照管=0.13-0.079=0.051，带入标准曲线 y=0.3693x-0.0189 得出 x=0.189，带入公式计算
离子结合型果胶含量(μmol/g 质量) =x÷W=1.89 μmol/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
