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土壤中性转化酶(S-NI)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 15 mL 试剂一充分溶解备用,用不完的试剂 2-8℃保存两周。
2、 标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 试剂一溶解,制备 10 mg/mL 葡萄糖标准液备用,2-8℃保存两周。
产品说明:
S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。
S-NI 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征光吸收,在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 NI 活性成正比。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水、30-50目筛、甲苯(不允许快递)。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min,波长调至540nm,蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04 mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。
3、 标准液稀释表
4、 加样表:
三、S-NI活性计算
注意事项:
1、 如果加入试剂三,煮沸 10min 后有混浊物出现,建议离心除去沉淀(10000rpm,2min),取上清测定吸光度;
2、 如果吸光值大于 1,可以用试剂一将上清液稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数);若吸光值较小,可以增加上清液体积或者土样质量进行测定。
实验实例:
1、 取两管 0.1g 林土,测定管加入试剂二 800μL、甲苯 20μL,对照管加入试剂一 800μL、甲苯 20μL,37℃准确水浴 1h 后,煮沸 10min,离心取上清稀释 5 倍,之后按照测定步骤操作,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.191-0.074=0.117,标准曲线:y=5.1864x-0.1698,x=0.055,计算酶活得:
S-NI(U/g 土样)=19.2×x÷W×5(稀释倍数)=19.2×0.055÷0.1×5(稀释倍数)=52.8 U/g 土样。
2、 取两管 0.1g 土样,测定管加入试剂二 800μL、甲苯 20μL,对照管加入试剂一 800μL、甲苯 20μL,37℃准确水浴 1h 后,煮沸 10min,离心取上清稀释 5 倍,之后按照测定步骤操作,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.161-0.086=0.075,标准曲线:y=5.1864x-0.1698,x=0.047,计算酶活得:
S-NI(U/g 土样)=19.2×x÷W×5(稀释倍数)=19.2×0.047÷0.1×5(稀释倍数)=45.12 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!