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土壤碱性蛋白酶(S-ALPT)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前取 1 瓶加入 6 mL 试剂一,沸水浴搅拌溶解后待用,用不完的试剂可以 2-8℃保存 4 周;
2、 标准品:20 μmol/mL 酪氨酸溶液。
产品说明:
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化,其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤碱性蛋白酶在碱性环境下催化蛋白质水解,与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。碱性条件下,土壤碱性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝,在680nm有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、蒸馏水、30-50目筛。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至680nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释:取10μL 20μmol/mL酪氨酸标准液,加入990μL蒸馏水,充分混匀,配制成0.2μmol/mL标准液使用,现用现配。(实验中每管需要44μL,为减小实验误差,故配制大体积)。
3、 样本测定:
三、土壤碱性蛋白酶活性计算
单位定义:每天每g土样中产生1μmol的酪氨酸为一个土壤碱性蛋白酶活力单位。
土壤碱性蛋白酶(U/g 土样)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T= 0.05×ΔA测定÷ΔA标准÷W
C标准:标准管浓度,0.2μmol/mL;V反总:反应体系总体积,0.25mL;T:反应时间,1d;W:样本质量,g。
注意事项:
当吸光值大于1.5时,建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定,计算时注意乘以稀释倍数。
实验实例:
1、 分别称取 0.05g 三叶草土于 1.5mLEP 管中,分别为对照管及测定管,按照测定步骤操作,用 96 孔板测定吸光度,计算ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.234-0.180=0.054,ΔA 标准=A 标准-A 空白=0.374-0.045=0.329,按土壤质量计算酶活得:
土壤碱性蛋白酶(U/g 土样)=0.05×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.05×0.054÷0.329÷0.05=0.1641 U/g 土样。
2、 分别称取 0.05g 森林 10 号土样于 1.5mLEP 管中,分别为对照管及测定管,按照测定步骤操作,用 96 孔板测定吸光度,计算ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.829-0.566=0.263,ΔA 标准=A 标准-A 空白=0.374-0.045=0.329,按土壤质量计算酶活得:
土壤碱性蛋白酶(U/g 土样)=0.05×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W= 0.05×0.263÷0.329÷0.05=0.7994 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!