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双缩脲法蛋白质含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格: 50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
提取液:自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。
产品说明:
样本可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本,尤其是动物材料。
技术指标:
最 低检出限:0.1304 mg/mL
线性范围:0.5-10 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
离心机、可见分光光度计、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、液体样本:澄清无色液体样本可以直接测定。
2、组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。(动物样本常常需要稀释)
3、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min,调节波长到540nm,蒸馏水调零。
2、 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入200μL蒸馏水,1000μL试剂一,混匀后室温静置15min,于540nm比色,记为A空白管。
3、 标准管:取1mL玻璃比色皿,加入200μL标准液,1000μL试剂一,混匀后室温静置15min,于540nm比色,记为A标准管。
4、 测定管:取1mL玻璃比色皿,加入200μL待测液,1000μL试剂一,混匀后室温静置15min,于540nm比色,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定 1-2 次。
三、样本中蛋白质浓度计算
注意事项:
1、 样本蛋白浓度须在0.5~10mg/mL范围内,低于0.5mg/mL不能用此法,高于10mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验,确保蛋白浓度在0.5~10mg/mL范围内。
2、 如果吸光值大于0.44,则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。
3、 待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰,提取液中应不含这些物质;否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!