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获取电话葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂三：临用前用 4 mL 蒸馏水溶解备用。
2、 试剂四：临用前用 4 mL 蒸馏水溶解备用。
3、 标准品：10 μmol/mL 磷标准液。临用前用蒸馏水稀释 16 倍至 0.625 μmol/mL 的标准溶液备用。
4、 工作液的配制：试剂二中加入 5 mL 试剂一充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
5、 定磷试剂的配制：按 H2O:试剂三:试剂四:试剂五（V:V:V:V）=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。
注意：配试剂最 好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。
2、 操作表：
三、G6P 活性计算
注意事项：
1、 建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2、 若A大于1.5或者显色完成后有沉淀产生，将上清液或者粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。
3、 定磷试剂应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。
实验实例：
1、 取 0.1g 稗草加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 测定管=0.254、A对照管=0.171、A 空白管=0.047、A 标准管=0.357，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.254-0.171=0.083，ΔA 标准=A标准管-A 空白管=0.357-0.047=0.31，按样本质量计算酶活得：
G6P（U/g 质量）=312.5×ΔA÷ΔA 标准÷W=312.5×0.083÷0.31÷0.1=836.6935 U/g 质量。
2、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 测定管=0.995、A 对照管=0.384、A 空白管=0.047、A 标准管=0.357，计算△A=A 测定管-A 对照管=0.995-0.384=0.611，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.357-0.047=0.31，按样本质量计算酶活得：
G6P（U/g 质量）=312.5×ΔA÷ΔA 标准÷W=312.5×0.611÷0.31÷0.1=6159.274 U/g 质量。
3、 取 0.1g 小鼠血清稀释 2 倍，直接检测，用 96 孔板测得 A 测定管=0.38、A 对照管=0.199、A 空白管=0.047、A标准管=0.357，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.38-0.199=0.181，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.357-0.047=0.31，按血清计算酶活得：
G6P（U/mL）=312.5×ΔA÷ΔA 标准×稀释倍数=312.5×0.181÷0.31×2=364.9194 U/mL。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
