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获取电话结合态淀粉合成酶（GBSS）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂四：临用前每支加入 5 mL 试剂一。
2、 试剂五：临用前每支加入 10 mL 试剂一。
3、 试剂六：临用前取 1 支加入 208 μL 双蒸水，充分溶解备用，用不完的试剂 4℃保存。
4、 试剂八：每支临用前加入溶解好的 4 mL 试剂四。
1、 反应液Ⅰ的配制：临用前在试剂二中加入 14 mL 试剂一，缓慢加热，逐渐升温至水沸腾使其溶解，冷却后加入试剂三混合溶解，这样可以分两批配制并且测定。
产品说明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束缚态存在于淀粉体中，催化淀粉链的加长反应，主要负责直链淀粉的合成。
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP；进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比，通过340nm下测定NADPH的增加量，可以计算GBSS活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 在EP管中按顺序加入下列试剂
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
三、GBSS活性计算
实验实例：
1. 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=0.2685-0.2532=0.0153，按样本质量计算酶活得：
GBSS 活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=6.6096 U/g 质量。
2. 取 0.1g 柳树加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心 10min，弃上清，在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀，置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=2.2252-2.2184=0.0068，按样本质量计算酶活得：
GBSS 活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=2.9376 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
