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获取电话线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒说明书
微量法
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
工作液的配制：临用前把试剂二转移到试剂一中混合溶解，用不完的试剂 4℃可保存一周；
产品说明：
线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2）又称CoQ-细胞色素C还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C，生成还原型细胞色素C。
与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
实验中所需仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 4 ℃ 600 g离心10min。将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。
3、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
4、 在沉淀中加入200μL提取液，超声波破碎（功率20%，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅲ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、 操作表：在微量玻璃比色皿或96孔板中分别加入
三、复合体Ⅲ活力单位的计算
注意事项：
1、 尽量保持比色皿内反应液温度在 37℃或 25℃。可以在记录初始吸光度 A1 后迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴中准确反应 2 分钟，之后迅速取出比色皿并擦干，记录 2min时的吸光度。
2、 当测定吸光值大于 1 时，建议将样本用提取液稀释后测定，计算公式中注意乘以稀释倍数。
3、 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
4、 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量(单独测定)。
5、 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
6、 本试剂盒试剂足够完成 100 管反应。
7、 附:使用样本重量计算公式：（样本检测数为 100T/24S）
实验实例：
1. 取 0.1g 兔子肾脏进行样本处理，将复溶后的沉淀稀释 2 倍后按照测定步骤操作，使用微量玻璃比色皿测得计算 ΔA=（A2 测定-A1 测定）-（A2 对照-A1 对照）=（0.9921-0.9077）-（0.9664-0.9419）=0.0599，按样本蛋白浓度计算得：
复合体Ⅲ（U/mg prot）=262×ΔA÷Cpr×2（稀释倍数）=262×0.0599÷2.56×2（稀释倍数）=12.26 U/mg prot。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
