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果胶裂解酶(PL)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
试剂一:溶液中如果有沉淀存在,可以 50℃水浴助溶。
产品说明:
果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,催化果胶分子链的消除裂解。来源比较广泛,主要来源于微生物,在食品加工工业中提高果汁产量方面有重要意义,在减少环境污染和降低能源消耗方面也具有潜在的应用价值。
果胶裂解酶作用于果胶中的 α-1,4 糖苷键,生成在还原端 C4 和 C5 之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在 235nm 处有特征吸收峰,测定 235nm 下吸光度的上升来表示果胶裂解酶的活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 235nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:
三、果胶裂解酶活性计算
注意事项:
1、 若 ΔA 大于 0.5,将粗酶液用蒸馏水稀释后再进行测定。若 A 测定管大于 1.5 时,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
2、 建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
3、 空白管正常情况下变化不超过 0.02。
实验实例:
1、 取 0.1g 香蕉皮加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管= A2 测定-A1 测定=0.528-0.5254=0.0025,按样本质量计算酶活得:
PL 活性(U/g 质量)= 64.1×ΔA÷W=1.5964 U/g 质量。
2、 取适量大肠杆菌(500 万)加入 1mL 提取液冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃离心 10min,取上清置于冰上,之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管= A2 测定-A1 测定=1.2213-0.8277=0.3936,按照细菌、真菌数量计算:
PL 活性(U/104 cell)= 64.1×ΔA÷细胞数量=241.67U/104 cell。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!