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获取电话谷丙转氨酶（GPT/ALT）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂一：提供 1 个 8 mL 棕瓶；临用前取 1 支试剂一倒入空瓶中，用 2 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；
2、 标准液：20 μmol/mL 丙酮酸钠。
产品说明：
谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细胞或细菌的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、标准曲线的稀释：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：
3、在EP管或在96孔板中加入下列试剂
三、GPT 活性计算
实验实例：
1、 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再按照测定步骤操作，用 96 孔板测得 A 测定管=0.701，A 对照管=0.271，计算?A=A 测定管-A 对照管=0.701-0.271=0.430，带入标准曲线 y=0.2796x+0.0476，计算 x=（0.430-0.0476）÷0.2796=1.368，按样本质量计算酶活得：
GPT（U/g 质量）=12x÷W=12×1.368÷0.1=164.16 U/g 质量。
2、 取兔血清直接检测，使用 96 孔板测得 A 测定管=0.307，A 对照管=0.247，计算?A=A 测定管-A 对照管=0.307-0.247=0.06，带入标准曲线 y=0.2796x+0.0476，计算 x=（0.06-0.0476）÷0.2796=0.044，按血清（浆）体积计算酶活得：
GPT（U/mL）=12x=12×0.044=0.528 U/mL。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
