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获取电话一氧化氮（NO）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂一：粉剂置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水混匀，-20℃分装保存两周，避免反复冻融；
2、 显色液：临用前按照实验所需用量按 A 液：B 液=1:1 充分混匀，现配现用；
3、 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。
产品说明：
技术指标：
最 低检出限：0.00074 μmol/mL
线性范围：0.00078-0.25 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织样本：按质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10 比例（建议称取 0.2g 样本，加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于 4℃，12000rpm，离心 15min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
2. 细胞样本：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000 : 1 的比例（建议 1000 万细胞加入 1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3min），然后于 4℃，12000rpm，离心 15min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
3. 液体样本：直接测定。若液体有浑浊则离心取上清测定。
二、测定步骤
1．可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，分光光度计蒸馏水调零。
2．将试剂一置于冰上备用。
3．标准液的稀释：将标准品用蒸馏水倍比稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL标准液。
4．标准液稀释可参考下表：
5．操作表：（在0.6mL EP管中操作）
三、NO 含量计算
1. 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴（x，μmol/mL），其对应的ΔA标准为y轴（y，ΔA标准），绘制标准曲线，得到标准方程y= kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。
2. NO含量的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
NO含量（μmol/mg prot）= x×V样÷(V样×Cpr) = x÷Cpr
（2）按样本质量计算
NO含量（μmol/g 质量）= x×V样÷(W×V样÷V样总) = x÷W
（3）按样本细胞数量计算
NO含量（μmol/104 cell）= x×V样÷(V样×细胞数量÷V样总) = x÷细胞数量
（4）按样本液体体积计算
NO含量（μmol/mL）= x×V样÷V样= x
V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g ；细胞数量：以104 为单位，万个。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
