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谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 提取液:使用前 37℃预热;
2、 试剂一:临用前加入 5 mL 提取液充分溶解待用;
3、 试剂二 B:临用前将试剂二 A 倒入试剂二 B 中混匀(A:B=1:4 比例),或者根据样本所需,按照体积比试剂二 A:试剂二 B=1:4 现配现用;
4、 标准品:10 μmol/mL 氮标准液,使用前 37℃预热。
产品说明:
GLS(EC3.5.1.2)主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定 GLS 催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5-10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液),冰上匀浆后于4℃,12000g 离心15 min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万个细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3s,间隔7s,总时间3min);然后4℃,12000g离心15min,取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至630nm,蒸馏水调零。
2. 标准液的制备:将标准溶液用提取液稀释8倍得1.25μmol/mL的标准溶液。
3. 样本测定:
三、GLS 酶活性计算
注意事项:
1、 当测定吸光值大于 0.8 时,建议将上清液用提取液进一步稀释后测量,计算时乘以稀释倍数。
2、 试剂二配置后尽快使用,若发现变色则不能再用。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!