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羟自由基清除能力检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂四:试剂放于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 9.84 mL 蒸馏水混匀,也可按比例现用现配,配好的试剂 2-8℃保存 4 周。
产品说明:
羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化,遭受氧化性损伤和破坏,导致细胞坏死或突变。羟自由基清除能力是样本抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织样本的制备:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清、果汁等液体样本可直接测定。若溶液有浑浊则离心后去上清进行测定。
3、提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如 5mg/mL。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至536nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 操作表:在1.5或0.5mLEP管中分别加入下列试剂
三、计算公式
羟自由基清除率 D%=(A测-A对)÷(A空-A对)×100%
注意事项:
1. 为了比较不同样本羟自由基清除能力,对于同一批样本必须加入等量的样本,血清、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。
2. 样本过多时,可以按体积比试剂一:试剂二:试剂三=0.05:0.1:0.1的比例配制工作液,现用现配。
实验实例:
1、 取 0.1g 脾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算:羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%=(0.77-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=82.78%。
2、 取 0.1g 稗草叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算:羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%=(0.698-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=71.9%。
3、 取兔血清后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算:羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%=(0.553-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=50%。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!