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超氧阴离子含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂四:自备氯仿;
2、 标准品:10μmol/mL 亚硝酸钠。
产品说明:
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO2-,NO2-在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下,生成紫红色的偶氮化合物,在 530nm 有特征吸收峰,根据 A530值可以计算样本中 O2-含量。
技术指标:
最 低检出限:0.001451 μmol/mL
线性范围:0.0019-0.5 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96 孔板、氯仿和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 植物、动物组织:称取约 0.1g 样本,加入提取液 1mL,充分研磨,12000rpm,4℃,离心 20min,取 20μL 上清测定蛋白含量,其余上清作为待测样本。
2. 血清或培养液:直接测定。
二、测定步骤:
1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 530nm,蒸馏水调零。
2. 标准溶液的制备取适量亚硝酸钠标准液,将其稀释为 0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078125μmol/mL 的标准溶液,用这些标准管做标准曲线。
3. 操作表
三、超氧阴离子含量计算公式:
注意事项:
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 样本制备好后,立刻进行测定,请勿将样本进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。
3、 试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。
实验实例:
1、 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液充分研磨,12000rpm,4℃,离心 20min,取上清之后按照测定步骤操作,使用96孔板测得计算?A样本=A测定管-A空白管=0.176-0.043=0.133,标准曲线y=2.9968x+0.0129,计算x=0.04,按样本质量计算酶活得:
超氧阴离子含量(μmol/g 质量)=2x÷W=0.8 μmol/g 质量。
2、 取 0.1g 树叶加入 1mL 提取液充分研磨,12000rpm,4℃,离心 20min,取上清之后按照测定步骤操作,使用 96孔板测得计算?A 样本=A 测定管-A 空白管=0.091-0.043=0.048,标准曲线 y=2.9968x+0.0129,计算 x=0.012,按样本质量计算酶活得:
超氧阴离子含量(μmol/g 质量)=2x÷W=0.24 μmol/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!