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抗坏血酸氧化酶(AAO)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 10 mL 蒸馏水充分溶解。
产品说明:
AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO氧化AsA所形成的MDHA可通过质膜上的细胞色素b还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。
AAO可直接氧化AsA,通过测定AsA的氧化量,可计算得AAO活力。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 样本,加提取液 1mL,冰上充分研磨,11000g 4℃离心 20min,取上清液待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到265nm,蒸馏水调零。
2、 试剂一在25℃水浴锅中预热30min。
3、 按下表依次在微量石英比色皿/96孔板中加入试剂
三、AAO活性计算
注意事项:
由于试剂一中含有一定浓度的蛋白(约 1mg/mL),所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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