找不到产品？留下需求帮您找
一键询价-
小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒
现货
3200￥
-
德国WTW 光度计配套试剂
现货
面议
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒） S6009M
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
一周
875￥
-
Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒
一周
516￥
-
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
一周
1244￥
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒）
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
博尔森 | 一周
875￥
-
Hitachi日立CT15RE台式离心机型号： CT15RE -
Hitachi日立超速离心机CP70ME型号： CP70ME -
电热鼓风干燥箱型号： CS101-ABN -
Agilent 8890 气相色谱系统型号： 8890 GC -
T700/T600 系列紫外可见分光光度计型号： T700/T600 -
艾立本Aliben-PTR-TOF MS 6000 VOCs质子转移反应飞行时间质谱仪型号： PTR-TOF MS 6000 -
SECMax-5000型高温凝胶渗透色谱系统型号： SECMax-5000 -
Orienda ELF 极简过柱机型号： Orienda ELF -
日立Primaide PLUS高效液相色谱仪型号： Primaide PLUS
获取电话丙酮酸羧化酶（PC）活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂三：临用前加入 3 mL 蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
2、 试剂四：临用前加入 2 mL 蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
3、 试剂六：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前按试剂六：试剂六稀释液=1:428（V:V）的比例稀释试剂六备用，现用现配；
4、 工作液的配制：按照试剂二：试剂三：试剂四=2:1:1 的体积比例充分混匀，现用现配。
产品说明：
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，但在植物体和大部分细菌中却不含此酶。是供给草酰乙酸的主要补充反应，是糖异生过程的第 一个限速酶。
PC 不可逆的催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP 和 Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH 生成苹果酸和 NAD+，在 340nm 下测定 NADH 氧化速率，即可反映 PC 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤;
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1.0 mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 4℃1000g 离心 10min。将上清液移至另一离心管中，4℃11000g 离心 15min。
3、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 PC（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
4、 在沉淀中加入 1mL 提取液，超声波破碎（功率 20%，超声 5 秒，间隔 10 秒，重复 12 次），用于 PC 活性测定，并且用于蛋白含量测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一用前37℃孵育15min。
3、 操作表：
三、PC酶活计算
1. 按微量石英比色皿计算：
单位的定义：每毫克蛋白每分钟消耗1 nmol 的NADH定义为一个酶活力单位。
PC酶活（U/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 1607×ΔA÷Cpr
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；V样：反应体系中样本体积，0.01mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间：2min。
2. 按96孔UV板计算：
将上述计算公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可
注意事项：
1. 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，ΔA 大于 0.8 时（96 孔 UV 板测定时 ΔA 大于 0.5 时），建议将粗酶液用提取液稀释后再进行测定。当 ΔA 小于 0.01 时，可以延长反应时间（5min 或 10min）来测定。
2. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过 0.05。
3. 样本的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有较高的蛋白浓度（约 1mg/mL），所以测定样本蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。
4. 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
5. 本试剂盒试剂足够完成 100 管反应。
6. 附:使用样本重量计算公式：（样本检测数为 100T/48S）
（1）按微量石英比色皿计算：
实验实例：
1、 取 0.1g 兔心组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，用提取液稀释上清 100 倍，稀释沉淀 4 倍，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算上清中的 ΔA 测定管=A1 测定-A2 测定=1.0091-0.7487=0.2604，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=0.9948-0.9678=0.027，ΔA1=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.2604-0.027=0.2334，沉淀中的 ΔA测定管=A1 测定-A2 测定=1.08-0.6157=0.4643，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=0.9948-0.9678=0.027，ΔA2=ΔA测定管-ΔA 空白管=0.4643-0.027=0.4373，按样本质量计算酶活得：
上清：PC 的酶活（U/g 质量）= 1607×ΔA1÷W×100(稀释倍数)=1607×0.2334÷0.1×100=375073.8 U/g 质量；
沉淀：PC 的酶活（U/g 质量)=1607×ΔA2÷W×4(稀释倍数)=1607×0.4373÷0.1×4=28109.64 U/g 质量；
PC 总酶活（U/g 质量）=1607×ΔA1÷W×100(稀释倍数)+1607×ΔA2÷W
=1607×0.2334÷0.1×100+1607×0.4373÷0.1×4=403183.44 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
