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获取电话超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂二：使用前先离心再吹打混匀。根据样本量将试剂二用蒸馏水稀释 10 倍后使用，当天用完。
2、 试剂四：根据样本量将试剂四用蒸馏水稀释 5 倍后使用，当天用完。
产品说明：
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、细胞超声破碎仪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细胞、细菌样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将试剂一、三和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上。
3. 样本测定（按顺序在 96 孔板或加入下列试剂）
三、SOD 活性计算
1、抑制百分率的计算
抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100%
尽量使样本的抑制百分率在 30-70%范围内，越靠近 50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于 30%或大于 70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本或者提高操作表中样本体积，同时减少相同的蒸馏水体积。
2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD 酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD 活性（U/mL）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷V 样×F
=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×F
（2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：
a.按样本蛋白浓度计算
SOD 活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(V 样×Cpr)×F
=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F
b.按样本质量计算
SOD 活性（U/g 质量）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(W×V 样÷V 样总)×F
=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F
c.按细菌或细胞数量计算
SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(500×V 样÷V 样总)×F
=0.02×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入反应体系中的样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积 1mL；
Cpr：蛋白样本浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；F：样本稀释倍数。
注意事项：
1、 样本和试剂二使用时在冰上放置。
2、 样本较多时，可按表格配制测定管工作液和对照管工作液（包含试剂一、（二）、三、蒸馏水），试剂四必须最后加入。
3、 反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。
实验实例：
1、 取 0.1g 大鼠肾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 测定= A 测定-A 对照=0.566-0.138=0.428，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.802-0.041=0.761，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100%=43.8%，按样本质量计算酶活得：
SOD 活性（U/g 质量）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=77.94 U/g 质量。
2、 取 0.1g 稗草叶片加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释 4 倍后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 测定= A 测定-A 对照=0.498-0.078=0.42，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.771-0.042=0.729，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100%=42.4%，按样本质量计算酶活得：
SOD 活性（U/g 质量）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×4（稀释倍数）=294.4U/g 质量。
3、 取 20μL 羊血清蒸馏水稀释 50 倍后直接按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA 测定= A 测定-A 对照=0.467-0.049=0.418，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.771-0.042=0.729，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100%=42.7%，按血清/血浆体积计算酶活得：
血清（浆）SOD 活性（U/mL）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×50（稀释倍数）=372.6 U/mL。
4、 取 1000 万细胞加入 1mL 提取液，超声破碎，离心取上清，直接按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA测定= A 测定-A 对照=0.52-0.058=0.462，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.802-0.04=0.762，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100%=39.4%，按细胞/细菌数量计算酶活得：
SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(1000×V 样÷V 样总)=0.0065 U/104 cell。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
