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获取电话谷氨酸合成酶（GOGAT）活性检测试剂盒说明书
微量法
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 工作液的配制：取试剂二、试剂三、试剂四各一支加入 10 mL 试剂一中溶解，现用现配，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。
产品说明：
GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非绿色组织的前质体中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。
GOGAT 以 NADH 为电子供体，催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸，NADH 在 340nm吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 工作液提前配置，平衡至室温。
3、 样本测定：
三、GOGAT 活性计算
注意事项：
1、测定期间样本在冰上放置，以免变性和失活。
2、最 好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
3、当 A1 大于 1.5 或者 ΔA 大于 0.6（酶标仪 ΔA 大于 0.4）时，建议将样本用蒸馏水稀释后测定，当 ΔA 过小时，可以延长酶促反应时间（10min 或 15min）或者加大加入的样本体积进行测量。
4、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
实验实例：
1、 取 0.1g 红豆芽加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA=A1-A2=1.3015-1.0895=0.212，按样本质量计算酶活得：
GOGAT（U/g 质量）=321.5×ΔA÷W=321.5×0.212÷0.1=681.58 U/g 质量。
2、 取 0.1g 吊兰加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A1-A2=0.9753-0.966=0.0093，按样本质量计算酶活得：
GOGAT（U/g 质量）=321.5×ΔA÷W=321.5×0.0093÷0.1=29.9 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
