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获取电话丙二醛（MDA）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：100T/96S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
MDA 检测工作液的配制：临用前取 1 瓶试剂二加入 20mL 试剂一，溶解混匀，2-8℃保存一个月。MDA 检测工作液较难溶解，可以 70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。
产品说明：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛（MDA）。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）缩合，生成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其最 大吸收波长在 532nm。进行比色后可估测样本中 MDA 的含量。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、 细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、 组织样本的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、 低、中脂血血清（浆）等液体样本：直接检测。
4、 高脂血或者油脂类样本：取 40μL 样本和 80μL 无水乙醇混合（即样本被稀释 3 倍），涡旋震荡 5min 后使用。不同高脂肪类样本可能会有不同的稀释倍数，可以稀释不同倍数进行预实验以确定最 佳稀释倍数。同时操作表中空白管的蒸馏水应以（33μL 蒸馏水+67μL 乙醇）代替。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，蒸馏水调零。
2、 按下表步骤加样：
混合液在 100℃水浴中保温 60min 后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温，离心 10min。吸取 200μL 上清液于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，测定各样本在 532nm 和 600nm 处的吸光度。分别计算ΔA532=A532 测定-A532 空白，ΔA600=A600 测定-A600 空白，ΔA=ΔA532-ΔA600（空白管只需做 1-2 次）。注意高脂血或者油脂类样本在操作表中空白管的蒸馏水应以（33μL 蒸馏水+67μL 乙醇）代替
三、MDA 含量计算
注意事项：
1. 若发现检测样本吸光值过低，可以将沸水浴时间 60min 调整为 90min 或者更长，但同一实验中的 MDA 的检测都需要延长到同一时间以免引起误差。
实验实例：
1、 取马血清按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算 ΔA532=A532 测定-A532 空白=0.078-0.047=0.031，ΔA600=A600测定-A600 空白=0.053-0.043=0.01，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.021 按体积计：
MDA 含量（nmol/mL）=53.763×ΔA =1.129 nmol/mL。
2、 取 500 万 hela 细胞，加 1mL 提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，用 96 孔板测得计算ΔA532=A532 测定-A532 空白=0.101-0.046=0.055，ΔA600=A600 测定-A600 空白=0.043-0.043=0，ΔA=ΔA532-ΔA600
=0.055，按照细菌或细胞数量计算：
MDA 含量（nmol/104 cell）=0.1075×ΔA=0.006nmol/104 cell
3、 取 0.1g 小鼠肝脏，加 1mL 提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，用 96 孔板测得计算
ΔA532=A532 测 定 -A532 空 白 =0.196-0.047=0.149，ΔA600=A600 测 定 -A600 空 白 =0.125-0.043=0.082，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.067，按照样本质量计算：
MDA 含量（nmol/g 质量）= 53.763×ΔA÷W=36.02 nmol/g 质量
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
