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仪器信息网试剂标物生化试剂流式试剂/试剂盒糖原磷酸化酶a（GPa）活性检测试剂盒紫外分光光度法

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上海博尔森生物科技有限公司

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糖原磷酸化酶a（GPa）活性检测试剂盒紫外分光光度法

价格：￥ 1350

品牌：博尔森

供货周期：一周

货号：BES-2241BTK

规格：50T/48S

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糖原磷酸化酶 a（GPa）活性检测试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

规格：50T/48S

产品内容：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；

试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存；

产品说明：

糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子α-1，6- 糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶 a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两种形式。糖原的分解主要在 GPa 的催化下进行。

未添加激活剂时，GPa 催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH，在340nm下测定 NADPH上升速率，即可反映GPa活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本的前处理：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；

2、工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、试剂三的配制：临用前在试剂三瓶中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

4、试剂四的配制：临用前在试剂四瓶中加入 2.5mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

5、将工作液、试剂三和试剂四置于 37℃预热5分钟；

6、在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂三、50μL试剂四、50μL蒸馏水和800μL工作液，立即混匀，记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

三、GPa 活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GPa（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T =643×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GPa（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T =643×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

生化试剂糖原磷酸化酶a（GPa）活性检测试剂盒紫外分光光度法由上海博尔森生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于流式试剂/试剂盒糖原磷酸化酶a（GPa）活性检测试剂盒紫外分光光度法的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应糖原磷酸化酶a（GPa）活性检测试剂盒紫外分光光度法外，上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供：二安替比林甲烷、焦硫酸钾、偶氮甲碱H

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