找不到产品？留下需求帮您找
一键询价-
3i3i流式试剂/试剂盒
一个月以上
1000 - 1万￥
-
花开富贵（测试）
一个月以上
1000 - 1万￥
-
小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒
现货
3200￥
-
小鼠单克隆抗体Ig类/亚类/亚型鉴定ELISA试剂盒
现货
3840￥
-
Waters WAT052880 AccQ-Fluor试剂盒
现货
1￥
-
德国WTW 光度计配套试剂 1.14895.0001等多个货号
现货
面议
-
德国WTW 光度计配套试剂
现货
面议
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒） S6009M
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
信裕生物 | 一周
875￥
获取电话磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入 35 mL 试剂一溶解。可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
2、 试剂三：液体置于试剂瓶内 EP 管内。临用前加入蒸馏水按体积比 1：120 稀释，现用现配。
3、 试剂四：液体置于试剂瓶内 EP 管内。临用前加入蒸馏水按体积比 7：250 稀释，现用现配。
4、 试剂五：粉剂置于试剂瓶内玻璃管内。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解；可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
5、 工作液的配制：将试剂二、试剂三、试剂四按 7:1:1（V:V:V）的比例配制工作液，工作液现用现配。
产品说明：
PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、开花植物、藻类、部分真菌和细菌中。该酶催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的第 一限速酶。
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清，置冰上待测。
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。
3、 操作表：在1mL石英比色皿中依次加入下列试剂：
三、PEPCK酶活计算
注意事项：
1、 当 A1 小于 1 或 ΔA 大于 0.6 时，建议将样本稀释适当倍数后再进行测定，以提高检测灵敏度。
2、 酶活性高的样本如动物肝、肾等组织，建议将样本用提取液稀释 5 倍或 5 倍以上测定。
3、 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过 0.06。
4、 加样、混匀等步骤要迅速，秒表计时要准确，如果条件允许建议由两人配合完成本测定试验。
实验实例：
1、 取 0.1g 肾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再用提取液稀释 10 倍，之后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定管= A1 测定-A2 测定=1.175-0.532=0.643，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=1.29-1.244=0.046，ΔA=ΔA
测定管-ΔA 空白管=0.643-0.046=0.597，按样本质量计算酶活得：
PEPCK 酶活（U/g 质量）= 3215.4×△A÷W×10（稀释倍数）=3215.4×0.597÷0.1×10=191959.4 U/g 质量。
2、 取 0.1g 芦荟加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定管= A1 测定-A2测定=1.257-1.106=0.151，ΔA 空白管= A1 空白-A2 空白=1.29-1.244=0.046，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.151-0.046=0.105，按样本质量计算酶活得：
PEPCK 酶活（U/g 质量）= 3215.4×ΔA÷W=3215.4×0.105÷0.1=3376.17 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
