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植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒 可见分光光度法

植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒 可见分光光度法

价格: 780

品牌:博尔森

供货周期: 一周

货号:BES-2228BTK

规格:50T/24S

植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格: 50T/24S

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

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溶液的配制:

1、 试剂一:使用前加少量水溶解,定容至 30 mL,避光、4℃保存(尽量现配现用);

2、 试剂三:自备乙酸乙酯。

产品说明:

生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。

受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲替(Triphenyl Formazone,即TFF)呈现红色,在波长485nm处有最 大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得植物脱氢酶活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰、研钵/匀浆器、蒸馏水、乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取 0.1g 的植物组织,用双蒸水清洗 3-4 次,用滤纸吸干水分,备用。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上,调节波长至485nm,乙酸乙酯调零。

2、 操作表:取5mLEP管依次加入

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三、脱氢酶活力计算

酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。

脱氢酶活性(U/g/h)=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W

T:反应时间,3h;W:样本质量,g。

注意事项:

1、 配制好的试剂一避光保存于4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

2、 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。

3、 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。

4、 如果测定出来的吸光值较大,需把样本适当稀释再进行测定,注意计算公式乘以稀释倍数。

实验实例:

1. 称取1g芦荟叶片,用双蒸水清洗3-4次,用滤纸吸干水分,按照测定步骤进行操作,测得计算ΔA=A测定-A对照=0.120-0.012=0.108,计算酶活得:

脱氢酶活性(U/g/h)=33×ΔA÷W=3.5964 U/g/h。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!




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