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组织总磷含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:强腐蚀性,强氧化性;
2、 试剂三:临用前配制,加入 10 mL 蒸馏水,溶解后再加入 5 mL 试剂二,混匀;
3、 标准品:1mmol/L 无机磷标准液。
产品说明:
磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率,进而为合理施肥提供依据。总磷经消化后,转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,一定条件下,钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质,通过测定660nm光吸收,即可计算无机磷含量,进而可计算出组织中总磷含量。
技术指标:
最 低检出限:0.0585 mmol/L
线性范围:0.0625-2 mmol/L
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。
操作步骤:
一、有机磷消化(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1 g 组织于带盖试管中,加浓硫酸 1.0 mL,盖紧(封口膜封口,防止水分散失)后沸水浴 10min 左右,待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后,加试剂一 200μL,充分混匀,盖紧后继续沸水浴,直到溶液呈透明状,取出室温冷却后,加蒸馏水 3.8 mL,充分混匀;室温,10000rpm,离心 10min,取上清液,待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 660 nm,蒸馏水调零。
2、打开水浴锅,调节温度到 40℃。
3、样本测定:
混匀后置于 40℃水浴保温 10min,室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度,分别记为 A 空白管、A 标准管、A测定管。
三、组织总磷含量计算
注意事项:
1、试剂三需临用前配制,限当天使用。
2、测定前先用 1~2 个样本做预实验,如吸光值大于 0.8 时,需用蒸馏水做相应稀释。
实验实例:
1、 取 0.1g 肾脏按照提取步骤操作,离心取上清之后按照测定步骤操作,测得计算 A 测定=0.273,A 空白=0.016,A标准=0.429,按样本质量计算总磷含量得:
总磷含量(mmol/g 质量)= 0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 质量。
2、 取 0.1g 脾按照提取步骤操作,离心取上清之后按照测定步骤操作,测得计算 A 测定=0.268,A 空白=0.016,A标准=0.429,按样本质量计算总磷含量得:
总磷含量(mmol/g 质量)= 0.005×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!