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获取电话β-木糖苷酶活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定 405nm光吸收增加速率，可计算 β-木糖苷酶活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、水浴锅、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 植物样本：称取约 0.1g 样本，加 1mL 提取液充分冰浴匀浆，然后 12000rpm，4℃，离心 20min，弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。
2. 细菌、真菌样本：收集约 500 万个细胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。
2、 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625μmol/mL。
3、 样本测定：
三、β-木糖苷酶活性计算
根据标准管的吸光度ΔA标准（x）和浓度（y，μmol/mL）建立标准曲线，将ΔA测定带入标准曲线中，计算样本生成的产物量y（μmol/mL）。
1、按样本蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（U/mg prot）=(y×V样)÷(V样×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样本 1min 内催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（U/g 质量）＝(y×V样)÷(W×V样÷V样总)÷T=0.05×y ÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 104个细胞 1min 内催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（U/104 cell）= (y×V样)÷(500×V样÷V样总)÷T=0.0001×y
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：
样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；T：反应时间，20min。
注意事项：
1、 吸光度变化应该控制在 0.05-0.6 之间。否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、 样本蛋白质含量需要另外测定。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
