找不到产品？留下需求帮您找
一键询价-
小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒
现货
3200￥
-
德国WTW 光度计配套试剂
现货
面议
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒） S6009M
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
一周
875￥
-
Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒
一周
516￥
-
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
一周
1244￥
-
Super ECL Plus（超敏化学发光检测试剂盒）
一周
566￥
-
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）
一周
375￥
-
Minerva Super Fusion Cloning Kit（无缝克隆试剂盒）
博尔森 | 一周
875￥
获取电话胰蛋白酶活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入 1mL 蒸馏水，充分溶解；
2、 工作液的配制：将试剂一、试剂二按 2：97 配制工作液，按需配制，实验前置于 37℃水浴预热 20min 以上。
产品说明：
胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等的辅助治疗。胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯键，生成 BA，BA 在 253nm 处有吸收峰，通过测定 253nm 吸光度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清液，即粗酶液，置冰上待测。或者直接称取 1mg 酶粉，加 1mL 提取液，充分混匀后置冰上待测（为保证实验的准确性建议梯度稀释）。
二、测定步驟：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至253nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定：
(1) 空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 990μL 工作液，再加入 10μL 蒸馏水，迅速于 253nm 测定 0s 和 60s 的吸光度，分别记为 A1、A2，ΔA 空白=A2-A1。
(2) 测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 990μL 工作液，再加入 10μL 粗酶液，迅速于 253nm 测定 0s 和 60s 的吸光度，分别记为 A3、A4，ΔA 测定=A4-A3。
三、胰蛋白酶活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
活性单位定义：在 1mL 体系下，37℃每毫克蛋白质每分钟催化 253nm 处吸光值增加 0.001 为一个单位。
胰蛋白酶（U/mg prot）= (ΔA 测定-ΔA 空白) ÷0.001÷（Cpr×V1）÷T=105×(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷Cpr
2、按样本质量计算：
活性单位定义：在 1mL 体系下，37℃每克组织每分钟催化 253nm 处吸光值增加 0.001 为一个单位。
胰蛋白酶（U/g 质量）= (ΔA 测定-ΔA 空白) ÷0.001÷（W×V1÷V2）÷T=105×(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷WCpr：粗酶液蛋白质浓度（需要另外测定），mg/mL；W：样本质量，g；V1：加入反应体系中粗酶液体积，10μL=0.01 mL；V2：粗酶液总体积，1 mL；T：反应时间，1min。
注意事项：
1. 实验前用 1～2 个样做预实验，保证吸光值变化在 0.01～0. 15 之间。
2. 若所测结果 ΔA 测定为负值，可适当将试剂一稀释（2 倍或 4 倍）再进行实验。
实验实例：
1、 取 0.1g 胰腺加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清液，置冰上，按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定=A4-A3=0.546-0.524=0.022，ΔA 空白=A2-A1=0.464-0.464=0，按样本质量计算酶活得：
胰蛋白酶（U/g 质量）=105×(ΔA 测定-ΔA 空白) ÷W=22000 U/g 质量
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
