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获取电话乳酸（LA）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂二：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前按试剂二（V）：蒸馏水（V）=10μL：450μL 的比例配制试
剂二溶液，现用现配；
2、 试剂四：临用前每瓶加入 8 mL 蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存 4 周；
3、 标准品：临用前加入 1.04 mL 蒸馏水配成 100 μmol/mL 的标准溶液；
产品说明：
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质，在570nm处有特征吸收峰。
技术指标：
最 低检出限：0.0387 μmol/mL
线性范围：0.039-1 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅或者恒温培养箱、乙醇和蒸馏水。
操作步骤：
一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。
3. 血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液一，4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，12000g离心10min后取上清待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，波长调至570nm，乙醇调零。
2、标准液的稀释：将100μmol/mL的标准溶液用蒸馏水稀释为1、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039μmol/mL的标准溶液待测。
3、加样表：
三、乳酸含量的计算
1、标准曲线的绘制
以各标准溶液浓度为x轴，以其对应的吸光值（ΔA标准）为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入公式中得到x（μmol/mL）。
2、乳酸含量计算
（1）按照蛋白含量计算
LA含量（μmol/mg prot）=x×V样本÷（V样本×Cpr）=x÷Cpr
（2）按照样本质量计算
LA含量（μmol/g 质量）=x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）=1.1875×x÷W
（3）按照细胞数量计算
LA含量（μmol/106 cell）=x×（V上清+V提取液二）÷ （5×V上清÷V提取液一）=0.2375×x
（4）按照液体体积计算
LA含量（μmol/mL）=x×（V上清+V提取液二）÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）]=13.0625×x
V样本：加入的样本体积，0.05mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需自行测定；V
上清：提取时上清液体积，0.8mL；V提取液二：加入的提取液二体积，0.15mL；V提取液一：加入的提取液一体
积，1mL；5：细胞数量，5×106个；V液体：液体样本体积，0.1mL。
注意事项：
1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2. 提取液一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取组织。
实验实例：
1、 取 0.1g 兔心加入 1mL 提取液一进行匀浆研磨离心，取 0.8mL 上清后加 0.15mL 提取液二，离心取上清后稀释 5
倍，之后按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定管=A 测定-A 对照=1.137-0.125=1.012，根据标准曲线
y=0.7826x+0.0215，计算 x=1.266，按样本质量计算含量得：
LA 含量（μmol/g 质量）=1.1875×x÷W×稀释倍数= 1.1875×1.266÷0.1×5=75.17 μmol/g 质量。
2、 取 100μL 小鼠血清加入 1mL 提取液一，取 0.8mL 上清后加 0.15mL 提取液二，离心取上清，之后按照测定步
骤操作，测得计算 ΔA 测定管=A 测定-A 对照=1.152-0.407=0.745，根据标准曲线 y=0.7826x+0.0215，x=0.924，
按照液体体积计算含量得：
LA 含量（μmol/mL）= 13.0625×x=13.0625×0.924=12.07 μmol/mL。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
