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土壤淀粉酶(S-AL)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 5 mL 蒸馏水,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌或震荡至粉剂溶解,用不
完的试剂 2-8℃保存 4 周。
2、 标准品:10 mg 麦芽糖。临用前加入 1.38 mL 蒸馏水配制成 20 μmol/mL 的储备液,2-8℃保存两周。
产品说明:
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在540nm处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、恒温培养箱/水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、30~50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min,波长调至540nm,蒸馏水调零。
2. 将20μmol/mL的麦芽糖储备液用蒸馏水稀释为1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3μmol/mL的标准溶液备用。
3. 标准品浓度稀释表
备注;实验中每个标准管需300μL标准溶液。
4. 操作表:
三、土壤淀粉酶活力的计算
1、标准曲线的绘制:
根据标准管的浓度(x,μmol/L)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,μmol/L)
2、酶活的计算:
单位的定义:每天每g土样产生1μmol还原糖定义为一个土壤淀粉酶活力。
S-AL(U/g 土样)=x×V反总÷W÷T=0.42×x÷W
V反总:酶促反应总体积,0.42mL;W:土样质量,g;T:反应时间,1d。
注意事项:
1、 当 ΔA 大于 1 时,建议将上清液稀释后再进行测定,注意在计算公式中乘以稀释倍数。
2、 若 ΔA 测定较小,增加反应的上清液体积或适当增加酶促反应时间,计算酶活时对公式进行修改。
3、 建议每次实验煮沸后的冷却时间保持一致,吸光值请于 30min 内测定完成。
实验实例:
1、 取 0.1g 三叶草土于 1.5mLEP 管中,依次加入 20μL 甲苯、200μL 试剂一、200μL 试剂二为测定管;取 0.1g 三叶草土于 1.5mLEP 管中,依次加入 20μL 甲苯、200μL 试剂一、200μL 蒸馏水为对照管,均放于 37℃培养 24h,后离心取上清再液稀释5倍,之后按照测定步骤操作,测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.624-0.109=0.515,标准曲线:y=1.289x-0.2826,x=0.6188,按土样重量计算酶活:
S-AL(U/g 土样)=0.42×x÷W×5(稀释倍数)=0.42×0.6188÷0.1×5(稀释倍数)=12.995 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!