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获取电话游离胆固醇（FC）含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 提取液：自备异丙醇；
2、 标准品：10 mg 胆固醇，临用前加入 517 μL 异丙醇，振荡溶解，即为 50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液，再将其用异丙醇稀释为 1 μmol/mL 的标准液，待测。
产品说明：
FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。测定原理：FC氧化酶催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。
技术指标：
最 低检出限：0.055 μmol/mL
线性范围：0.0625-4 μmol/mL
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、异丙醇、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）样本：直接测定。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2. 按需取出一定量的工作液，并在37℃水浴中预热30min，其余的4℃保存。
3. 样本测定：1.5mL离心管中加入下列试剂：
混匀，室温静置 15min 后于 500nm 下测吸光度，记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管。（空白管和标准管分别只需做 1-2 个）
三、计算公式
1. 血清（浆）中 FC 含量计算：
FC 含量（μmol/dL）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×100
=100×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
C 标准液：标准液的浓度，1μmol/mL；100：单位换算系数，1dL=100mL。
2. 组织中 FC 含量计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
FC 含量（μmol/mg prot）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×V 样总÷（Cpr×V 样总）
=（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr
(2) 按样本质量计算
FC 含量（μmol/g 质量）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×V 样总÷W
=（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W
C 标准液：标准液的浓度，1μmol/mL；V 样总：加入提取液的体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
3. 细胞、细菌中 FC 含量计算
FC 含量(μmol/104
cell)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷500
=0.002×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
C 标准液：标准液的浓度，1μmol/mL；500：细菌或细胞数量，500 万；V 样总：加入提取液的体积，1mL。
注意事项：
如果样本吸光值大于 1.5，建议将样本用提取液稀释后进行测定。
实验实例：
1. 取 0.1g 小鼠肝脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得 A 空白管=0.006、A 标
准管=0.348、A 测定管=0.188，按样本质量计算含量得：
FC 含量（μmol/g 质量）=（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W =5.322 μmol/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
