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获取电话谷草转氨酶（GOT/AST）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格: 50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前每瓶用 4 mL 蒸馏水溶解；现用现配；
2、 标准液：20 μmol/mL 丙酮酸钠。
产品说明：
谷草转氨酶又叫天门冬氨酸氨基转移酶（ 2.6.1.1），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT在心肌细胞中含量最 高，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。GOT催化α-酮戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm吸光度的变化，即可计算GOT酶活力。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细胞或细菌样本的制备：
先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、标准曲线的测定：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到相应浓度度标准管：
3、在 EP 管中加入下列试剂
注：0μmol/mL 标准管为空白管。
三、GOT 活性计算
1. 标准曲线的绘制：以各标准溶液浓度为x轴，以?A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A对照管）带入方程求x值。
2. GOT活性计算：
（1）按样本质量计算：
单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。
GOT（U/g 质量）=x×（V样本+V试剂一）÷（W×V样本÷V样总）÷T=12x÷W
（2）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。
GOT（U/mg prot）=x×（V样本+V试剂一）÷（Cpr×V样本）÷T=12x÷Cpr
（3）按血清体积计算：
单位定义：每小时每mL血清样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。
GOT（U/mL）=x×（V样本+V试剂一）÷V样本÷T=12x
（4）按细胞数量计算：
单位定义：每小时每104个细胞样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GOT活力单位。
GOT（U/104 cell）=x×（V样本+V试剂一）÷（V样本÷V样总×500）÷T=0.024x
V样本：吸取样本体积，0.02mL；V试剂一：吸取试剂一体积，0.1mL；V样总：吸取提取液体积，1mL；W：
样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5h；500：细胞或细菌数量，500万。
实验实例：
1. 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再按照测定步骤操作，测得 A 测定管=0.782，
A 对照管=0.488，标准曲线 y=0.4767x+0.0611，计算?A=A 测定管-A 对照管=0.782-0.488=0.294，x=（0.294-0.0611）÷0.4767=0.489，按样本质量计算酶活得：
GOT（U/g 质量）=12x÷W=12×0.489÷0.1=58.68 U/g 质量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
