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获取电话人单核细胞白血病（STR鉴定报告）
一、细胞简介
平台编号：bio-73174
规格：1×10?cells/T25培养瓶
拉丁属名：THP-1
细胞名称：THP-1（人单核细胞白血病）
种属：人
年龄（性别）：男
组织来源：急性单核细胞白血病，单核细胞
生长特性：悬浮
细胞形态：单核细胞
背景描述：THP-1细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用，无表面和胞质免疫球蛋白。THP-1细胞可以用佛波醇、TPA诱导单核细胞分化。
生长培养基：RPMI-1640(货号:PM150110)＋10% FBS(货号:164210-500)＋0.05mM β-mercaptoethanol(货号:PB180633)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
说明书下载：THP-1.pdf
二、细胞生长条件
1、培养条件
完全培养基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。
培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%
2、传代方法
收到细胞后，在倒置镜下(zui好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
⑴如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，低速离心，打开细胞培养瓶，吸出培养液（注意不要吸出细胞），换 10ml新鲜培养液后继续培养。
⑵如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
①低速离心，弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。
②按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中（补加完全培养基至8到10ml）。如果没有特别说明，收到细胞后的第yi次传代一般是一传二。
注：⑴观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
⑵瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
⑶有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。
⑷收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。
3、冻存方法
冻存液：90%胎牛血清，10%DMSO
储存：液氮储存
三、细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的zui好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，悬浮细胞需离心处理，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。
四、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、贴壁细胞，传代参考如下：
①弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
②加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
③按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
④将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2、悬浮细胞，传代参考如下：
方法①：收集细胞，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法②：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
刚收到细胞时，胎牛血清可以用15%培养两三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞稳定后再调回10%即可收到细胞后如细胞状态不佳，或培养中遇到问题，烦请当天尽快联系，以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要参考依据，请您务必重视。
五、“细胞培养三不要”
下面有三个小经验可以和大家分享一下：
1、不要烧瓶口。
大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。
2、不要频繁看细胞。
对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3、不要怕消化。
人源细胞系在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。" 详见细胞说明书。
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